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生物透射電鏡

更新時(shí)間:2024-09-26

簡(jiǎn)要描述:

生物透射電鏡(TEM)利用電子束作光源,用電磁場(chǎng)作透鏡,經(jīng)加速和聚集的電子束投射到非常薄的樣品上,形成明暗不同的影像,TEM在中和物理學(xué)和生物學(xué)相關(guān)的許多科學(xué)領(lǐng)域都是重要的分析方法,如基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究、病毒學(xué)、材料科學(xué)、以及納米技術(shù)、半導(dǎo)體研究等等。

生物透射電鏡(TEM)利用電子束作光源,用電磁場(chǎng)作透鏡,經(jīng)加速和聚集的電子束投射到非常薄的樣品上,形成明暗不同的影像,TEM在中和物理學(xué)和生物學(xué)相關(guān)的許多科學(xué)領(lǐng)域都是重要的分析方法,如基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究、病毒學(xué)、材料科學(xué)、以及納米技術(shù)、半導(dǎo)體研究等等。


透射電子顯微鏡的分辨率比光學(xué)顯微鏡高的很多,分辨力可達(dá)0.2nm,200-200k倍之間連續(xù)可調(diào); 可以用于觀察樣品的精細(xì)結(jié)構(gòu),甚至可以用于觀察僅僅一列分子的結(jié)構(gòu)。


生物透射電鏡送樣運(yùn)輸要求:

以下所有樣本必須盡量新鮮,固定液或懸浮液都不得冷凍結(jié)冰!


1、動(dòng)物組織樣本

①1-3min內(nèi)取樣,取樣組織2mmX2mm大小,盡量薄。如來不及修整組織大小可先于電鏡固定液內(nèi)固定半小時(shí)左右待組織變硬以后再修整組織進(jìn)行后固定。超出此范圍后組織會(huì)無法*固定,后續(xù)實(shí)驗(yàn)無法完成,務(wù)必請(qǐng)重視此過程。

②取材時(shí)盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質(zhì);觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚,腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進(jìn)行固定)。

③取材時(shí)一定注意避免鑷子擠壓等機(jī)械損傷,刀片要鋒利避免挫傷組織。

④組織取下后立即投入電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。4°時(shí)樣本可保存1個(gè)月左右。


2、植物組織樣本

①取材要求同動(dòng)物組織樣本。

②組織投入固定液后需要進(jìn)行真空抽氣讓組織沉底,如無條件抽氣可用濾紙將組織塞進(jìn)固定液內(nèi),組織不能漂浮在固定液表面。


3、細(xì)胞樣本

貼壁細(xì)胞

方法一:

①培養(yǎng)好的細(xì)胞棄培養(yǎng)基,加入2.5%的常溫戊二醛固定液。

②常溫固定5min左右,用細(xì)胞刮(或軟橡膠蓋切得平整小方塊)沿一個(gè)方向輕輕刮下細(xì)胞,切記不要反復(fù)刮,避免細(xì)胞刮破。

③用巴氏吸管把細(xì)胞液吸入離心管內(nèi),放入離心機(jī)(不超過3000轉(zhuǎn)),離心2min左右,細(xì)胞團(tuán)要有綠豆大小。

④棄固定液后加新的電鏡固定液,把細(xì)胞團(tuán)輕輕挑起,懸浮于固定液中。室溫避光固定30min,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。


方法二:(對(duì)細(xì)胞形態(tài)沒有要求的)

①培養(yǎng)好的細(xì)胞棄培養(yǎng)基,加入胰mei。

②胰mei消化好后(時(shí)間不宜過長(zhǎng)),用培養(yǎng)基終止消化,用吸管把細(xì)胞吹下來。吸入離心管,離心(不超過3000轉(zhuǎn)),2min左右,細(xì)胞團(tuán)要有綠豆大小。

③棄上清,加入2.5%的常溫戊二醛固定液,把細(xì)胞團(tuán)輕輕挑起,懸浮于固定液中。

④室溫避光固定30min,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞要肉眼可見細(xì)胞沉淀綠豆大小,棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。


4、細(xì)菌樣本

長(zhǎng)于固體培養(yǎng)基的細(xì)菌:連帶著培養(yǎng)基一起挑下細(xì)菌放于電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存, 4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

懸浮細(xì)菌孢子等:離心收集細(xì)菌要肉眼可見細(xì)菌沉淀綠豆大小,棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。


5、病毒

破碎組織細(xì)胞,粗離心去除細(xì)胞碎片取上清,超速離心分離出病毒(病毒提取的過程需要客戶自己完成)。用緩沖液(如PBS)懸浮病毒,遠(yuǎn)距離-80°凍存運(yùn)輸,近距離4°保存運(yùn)輸,盡快滴片做負(fù)染后及時(shí)電鏡觀察拍照。


6、外秘體囊泡等

客戶自己完成外秘體囊泡等的提取收集,用緩沖液(如PBS)或者試劑盒中的保存液懸浮,遠(yuǎn)距離-80°凍存運(yùn)輸,近距離4°保存運(yùn)輸,盡快制片做負(fù)染后及時(shí)電鏡觀察拍照。(因此類樣品極易降解,樣品越新鮮越好,最好數(shù)小時(shí)內(nèi)完成滴片負(fù)染,否則做出的效果很不理想甚至*觀察不到)。


7、納米材料等無機(jī)材料

直接準(zhǔn)備粉劑或用緩沖液(如PBS)懸浮,常溫保存運(yùn)輸即可(需要超聲的備注)。做負(fù)染后電鏡觀察拍照。


注意事項(xiàng):

1.拍照需要求簡(jiǎn)潔清楚,有側(cè)重點(diǎn)。需附參考圖或參考文獻(xiàn)(如有特殊要求請(qǐng)?zhí)崆皞渥⒄f明)。

2.拍照倍數(shù)由參考文獻(xiàn)效果圖來確定(不同機(jī)器不同廠家倍數(shù)標(biāo)準(zhǔn)不同,不能互通參考)。

3.圖片本身左下角附有拍照倍數(shù)(X-K 單位千倍),右下角附有標(biāo)尺(十格總長(zhǎng)即為標(biāo)尺所注長(zhǎng)度)。


毓秀生物科技(上海)有限公司是一家專注于生物科技前沿技術(shù)研發(fā)和科研技術(shù)服務(wù)的公司,公司建有專業(yè)的分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、組織病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室,為眾多生物醫(yī)藥企業(yè)、科研機(jī)構(gòu)、醫(yī)院及高校提供分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、病理形態(tài)學(xué)等方面科研服務(wù)。公司核心團(tuán)隊(duì)曾在國(guó)內(nèi)外許多優(yōu)秀學(xué)府從事過多年研發(fā)工作,秉承“為客戶創(chuàng)造價(jià)值,為員工實(shí)現(xiàn)夢(mèng)想,為社會(huì)創(chuàng)造財(cái)富"的經(jīng)營(yíng)理念,堅(jiān)持以技術(shù)創(chuàng)新為先導(dǎo),以服務(wù)質(zhì)量為根本,為中國(guó)生物醫(yī)藥和科學(xué)研究提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。


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